HPLC法測定紫參膠囊中芍藥苷的含量

HPLC法測定紫參膠囊中芍藥苷的含量
摘要：建立紫參膠囊中芍藥苷的測定方法，採用高效液相色譜法，色譜柱：Kromasil C18柱，流動相：乙腈-1%磷酸溶液（30：70），流速：1.0ml·min-1,檢測波長：270nm。芍藥苷在之間線性關係良好，r=0.9998；平均加樣回收率為98.9%，（n=5,RSD=0.8%）。該方法操作簡單，分離效果好，重複性好，可以用於紫參膠囊的質量控制。
關鍵詞：紫參膠囊；芍藥苷：含量測定；HPLC
   紫參膠囊是在中醫理論指導下研發的新中藥複方製劑，由紫河車、太子參、白芍、酸棗仁、茯神等十味中藥組成，具有温腎填精，雙調陰陽的功效，用於絕經期綜合症，閉經，月經不調，不孕症等。芍藥苷為方中主藥白芍中主要有效成分，但原標準中僅對其定性鑑別沒有含量測定方法。為控制產品質量，保證療效，我們建立了製劑中芍藥苷的含量測定方法。
Determination of Paeoniflorin in Zishen Capsules by HPLC
               Cheng Shi-Yun1 ,Hao Zi-Xin2
(i Provincial Institute for Food and Drug Control,hefei,230051 ;
ng Institute for Drug Control,Anqing,Anhui)
ABSTRACT  A HPLC method for the determination of paeoniflorin in Zishen Capsules was established.A Kromasil C18 column was uesd with acetonitrile and water and phosphoric acid(30:70:1) as the mobile flow rate was 1.0ml· detection wavelength was linear range was(r=0.9998)and the average recovety was %( n=5,RSD=0.8%) method is simple and sensitive with good separation efficiency can be used in the standard of Zishen Capsules.
KEY WORDS HPLC;Zishen Capsules;paeoniflorin;determination
1 材料與儀器
    高效液相色譜儀，紫外檢測器。
芍藥苷對照品（中國藥品生物製品檢定所，批號：）；紫參膠囊（某醫院提供）；甲醇、乙腈為色譜純，重蒸水，其它試劑為分析純。
2        方法與結果
2.1   色譜條件
色譜柱：Kromasil C18柱（4.6mm×250mm,5μm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85），流速：1.0ml·min-1,檢測波長：230nm，柱温：25；進樣量：20μl。理論板數：大於。分離度：。
2.2   溶液的製備
2.2.1 對照品溶液的製備
精密稱取芍藥苷對照品mg，置ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液ml置ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。
2.2.2      樣品溶液的製備
取本品20粒的內容物研細混勻，取約g,精密稱取，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率5kHz）30分鐘，放置至室温，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液即得。
2.2.3 陰性對照溶液的製備
取缺白芍的處方藥，按樣品溶液製備方法制備陰性對照溶液。
2.3 線性關係考察
分別精密量取對照品溶液（濃度）4，8，12，16，20μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件在230nm波長處測定，以進樣量為橫座標，以峯面積為縱座標，繪製標準曲線，經迴歸處理，方程：結果表明，芍藥苷進樣量在範圍內線性關係良好。
2.4 精密度考察
精密吸取同一對照品溶液連續進樣5次，每次20μl，測定峯面積，RSD為0.6%，表明精密度良好。
2.5 重複性試驗
精密稱取同一批號（）樣品5份按供試液製備方法制備，依法測定。結果芍藥苷平均含量是mg·g-1,其RSD為1.2%，表明本品測定方法重複性良好。
2.6 穩定性試驗
取同一供試品溶液分別在配製後0，2，4，6，8，12，24進樣20μl，測定峯面積，RSD為1.6%，結果顯示，供試品溶液在12小時內基本穩定。
2.7 陰性對照試驗
取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照溶液，按本文條件各進樣20μl，色譜圖見圖1，在本文條件下，陰性對照無干擾。
2.8 加樣回收率試驗
精密稱取已知含量的同一批（批號：，含量：mg·g-1）的樣品9份，分別精密加入芍藥苷對照品ml，按上述含量測定方法測定，結果見表1。
           表1 加樣回收率試驗結果
 




樣品中含量       加入量       測得總量      回收率     平均回收率     RSD
（mg）         （mg）        （mg）       （%）        （%）       （%）




1.5013        0.4096
1.4980        0.4096
1.4902        0.4096
1.5031       
1.5122
1.5072
1.4950
1.5168
1.5036
 




 
2.9 樣品含量測定
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定峯面積，按外標法計算含量，結果3批樣品（批號：）含量分別為mg·g-1。
3 討論
對供試品溶液提取條件進行了考察，分別採用甲醇50％甲醇作為溶劑，結果以甲醇提取效果較好；另外對提取時間進行考察，結果發現超聲提取30分鐘即能將芍藥苷提取完全。
對芍藥苷甲醇液進行光譜掃描，在波長230nm處有最大吸收，根據2005年版藥典，本文選擇測定波長為230nm。
芍藥苷的含量測定方法已有多篇文獻報道[],本文建立的方法具有樣品處理簡單，本品含量測定理論板數按淫羊藿苷峯計算應不低於時，樣品分離良好，重複性好，陰性無干擾，加樣回收率高，為完善質量標準提供了方法和依據。
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