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如何從臨牀標本中分離核酸?

欄目: 實用文精選 / 發佈於: / 人氣:5.58K

1.臨牀分子生物學檢驗的主要對象是什麼?是核酸分子生物標誌物即是DNA、RNA,所以怎樣從臨牀標本中提取核酸是整個分子檢驗的前提。而提取核酸的質量也將直接影響檢驗的科學準確性。

如何從臨牀標本中分離核酸?

2.地中海貧血這種病是一種遺傳性疾病,要想檢測待檢者是否含有這種疾病的致病基因的突變,臨牀上是取待檢者的血液標本,此外,臨牀上檢驗感染性疾病乙肝病毒DNA,同樣採取的是待檢者的血液標本,通過對靜脈血的分子檢測,我們可以明確待檢者是否有HBV的感染,量是多少,可以體現HBV在體內的複製程度如何,並且是哪一種基因型HBV的感染,我們知道病毒容易發生基因的變異,不同基因型的HBV病毒學和臨牀特性不同,所以HBV的基因分型有很重要的臨牀意義,此外還可以檢測HBV是否發生了耐藥基因的變異,使其對抗病毒藥物產生了耐藥性,除了HBV還可以檢測丙肝病毒HCV和艾滋病毒HIV這些RNA病毒的特異RNA片段,而用到的同樣是待檢者的靜脈血標本。

3.讓我們整體來看一下,臨牀分子檢驗的項目有哪些呢?這是比較全的關於臨牀中可以做的一些分子檢驗項目...

4.用於後續檢測核酸的血液標本,必須使用正確的血液抗凝劑如乙二胺四乙酸二鈉,簡稱...

而不能使用肝素抗凝劑,因為肝素對後續核酸檢測中的一些酶有較強的抑制作用,就容易造成假陰性的結果。

5.採集分泌物標本時,現在常用到一種小工具叫棉拭子有口腔拭子、咽拭子、肛拭子。就是棉花纏繞在一根小棍一端,可以吸附脱落的細胞或者分泌物。棉拭子在感染病原體檢測中,棉拭子常用於檢測呼吸道、消化道處的樣品採集。採樣後的棉拭子置於保存液中就能用於後續核酸的提取中。

6.不僅便於腫瘤的早期診斷,還可以對患者預後作出評估,還可以用來指導腫瘤的藥物靶向治療,腫瘤標本如果是新鮮組織直接放入生理鹽水中洗滌研磨,就可以用於核酸的提取,如果是石蠟切片組織,需要先進行脱蠟處理,這裏要注意....從而影響後面結果的準確性。

7.尤其是在感染性疾病發生髮展的進程中,病原體的數量會不斷變化,低於計數的檢測線就會出現假陰性的結果,所以在標本採集時要適時適量的採集標本並選擇合適的分子生物學技術手段,以最大程度的保證檢驗結果的準確性。那針對圖中所示HIV的感染你會得到什麼樣的具體的檢驗信息呢?解釋該圖:艾滋病毒感染多久可以檢測到主要取決於檢測方法,

艾滋病病毒抗體檢測一般要在感染6-8周左右可以檢測到;

艾滋病病毒抗原檢測一般要在感染3-4周左右可以檢測到;

艾滋病病毒基因檢測一般要在感染10左右可以檢測到;

不同的檢驗指標在樣本採集不同時間檢測出的概率不同。

8.除了採集,在標本的運送和保存環節也需要額外注意,標本採集後應儘快送至實驗室進行檢測,以防待檢核酸分子的降解,儘可能在2-8度下低温運送。

分離純化核酸:

1.多數情況下,我們提取的核酸分子是來源於標本中細胞的,例如血液標本中的病原體細胞,唾液標本中我們自身的口腔粘膜上皮細胞,所以核酸分離的第一步就是要裂解細胞,然後....

2.接下來分別介紹DNA、RNA的分離純化方法,那由於不同的核酸分子的亞細胞...

3.基因組DNA包涵了生物體一套完整單倍體的所有遺傳物質。

和對DNA有吸附作用的官能基團-例如硅,通過二者的可逆結合來分離純化DNA的,而且不僅是基因組DNA,吸附柱法還可以通過其他不同的吸附載體和裂解液,來分離純化其他的核酸,如質粒DNA...,吸附柱法相比經典的酚抽提法更快速、安全(不需要用到酚、氯仿這些有毒試劑)...

5.磁珠法是在納米級磁珠表面裝載有對DNA有吸附作用的官能基團,通過官能集團與DNA生物可逆結合....用這種方法提取DNA純度高,更便捷大概30-40分鐘就可以完成DNA的提取。所以也便於高通量、自動化操作。

6.那恰當的操作是儘量能在低温條件下操作,避免高温對核酸化學鍵的破壞,同時低温可以有效抑制核酸酶對核酸的降解活性。提取大分子線性核酸時需要額外注意物理機械力對核酸結構的破壞,在某些時候還是要温柔一些,不能過大力度的震盪,還要保證緩衝液的PH值,避免過酸或過鹼對磷酸二酯鍵的破壞。

7.提取總RNA不能滿足所有的通途,因為總RNA中絕大部分是rRNA,需要進一步分離純化mRNA。

8.自動化核酸提取可有效節省人力成本,縮短工作時間,保證臨牀檢測結果的可靠性和重複性,同時把生物安全風險和樣本間的交叉污染的風險降到最低。