EPC（鯉魚上皮細胞）

EPC（鯉魚上皮細胞）

一、生長特性：Adherent貼壁細胞

二、培養温度：25°C (20-30°C)

三、敏感病毒：

Infectious pancreatic necrosis virus傳染性胰腺壞死病毒

Infectious hematopoietic necrosis virus傳染性造血壞死病毒

Spring Viremia of Carp Virus鯉春病毒血症病毒

Viral hemorrhagic septicemia virus病毒性出血性敗血症病毒

Epizootic hematopoietic necrosis virus流行性造血壞死病毒

Largemouth bass virus大口黑鱸病毒

四、培養條件

該細胞系的基本培養基為ATCC制定的Eagle's Minimal Essential Medium培養基，目錄號30-2003。為製作完整的生長培養基，向基礎培養基中添加以下成分：胎牛血清，最終濃度為10%。

Eagle最低基礎培養基（Eagle's Minimal Essential Medium）簡稱MEME培養基，是一種細胞培養基，由Harry Eagle 研發，用於組織培養物中細胞的護理。本培養基配方中含有Earle's salts和非必需氨基酸、L-谷氨醯胺、丙酸鈉和碳酸氫鈉。本培養基中碳酸氫鈉含量減少(NaHCO3, 1.5 g/L)，適用於5% CO2條件下培養。如果培養條件中CO2濃度高於5%，則需要增加碳酸氫鈉含量。

三、復甦

1、在20-30°C水浴中輕輕攪拌，解凍小瓶。為減少污染的可能性，請將O形圈和蓋遠離水。解凍應迅速（約2分鐘）。

2、一旦內容物解凍，立即將小瓶從水浴中取出，並通過浸泡或噴灑70%乙醇進行去污。從這一點開始的所有操作都應在嚴格的無菌條件下進行。

3、將小瓶內容物轉移到含有9.0 mL完整培養基的離心管中，並以約125 x g的速度旋轉5至10分鐘。

4、用推薦的完整培養基重新懸浮細胞顆粒（有關培養物推薦稀釋比，請參閲特定批次信息），並分配到25 cm2或75 cm2培養瓶中。在細胞恢復過程中，避免培養基鹼度過高很重要。建議在添加小瓶內容物之前，將含有完整生長培養基的培養容器置於培養箱中至少15分鐘，以使培養基達到其正常pH值（7.0至7.6）。pH值（7.0至7.6）。

五、傳代

本協議中使用的體積適用於75 cm2的燒瓶；按比例減少或增加其他尺寸培養容器的分離培養基量。

1、取出棄掉培養液

2、用不含Ca++/Mg++的Dulbecco磷酸鹽緩衝鹽水（D-PBS）或0.25%（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液短暫沖洗細胞層，以去除所有含有胰蛋白酶抑制劑的微量血清。

3、向燒瓶中添加1.0至2.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，並在倒置顯微鏡下觀察細胞，直到細胞層分散（通常在5分鐘內）。

4、添加6.0至8.0 mL完整生長培養基，輕輕移液吸取細胞。

5、向新的培養容器中加入適當的細胞懸浮液。建議接種量為5 x 103至7 x 103活細胞/cm2。

6、在25°C下培養。我們建議將培養物的細胞濃度保持在1 x 105和2 x 105個細胞/cm2之間。

傳代率：1：4-1：6

六、凍存

添加5%（v/v）二甲基亞碸（ATCC 4-X）的完整生長培養基

培養時間：36h